MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TECNICOS
LABORATORIO “Dr. ZUNA”
SECCION
INMUNOLOGIA
SOLICITUD DE ANALISIS
La solicitud de ANALISIS, será siempre emitida por el médico responsable del tratamiento o en su defecto por orden verbal del paciente.
La solicitud debe ser por escrito, en forma clara y debe contener por norma los siguientes datos:
· Fecha de la solicitud.
· Nombre (s) y Apellidos del Paciente.
· Edad del paciente.
· Clínica en la que se encuentra internado el paciente si corresponde.
· Datos de transfusiones anteriores.
· Sello con Matrícula Profesional del Médico solicitante.
TIPO DE MUESTRAS
El área de inmunologìa, recepcionara muestras de sangre sin anticoagulante y
En casos especiales muestras anticoaguladas (tacrolimus).
Otros líquidos biológicos a expresa solicitud del medico del paciente.
REGISTRO INTERNO DEL PACIENTE
Las muestras que ingresan al área, generalmente deben tener un registro de ingreso por secretaria, donde se le asigna un número personal y un código de barra, único en todo el laboratorio.
El área de inmunología, revisa el código del paciente y las pruebas solicitadas, mediante el sistema informático en red, guiándose por el número personal asignado y/o el nombre del paciente.
Se precederá a realizar un registro interno del paciente donde se le asigna un número de ingreso. El cual se convertirá en el número diario de trabajo y de depósito para su búsqueda posterior, se hace notar que este es un registro numérico exclusivamente de uso en el área y no del laboratorio.
REGISTRO DE LAS PRUEBAS
El área de inmunología maneja un cuaderno de registro de pruebas donde se registra el nombre del paciente, registro del laboratorio y numero interno del área, del cual se realiza el copiado de los resultados obtenidos.
LABORATORIO INMUNOSEROLOGIA
ELISA
Es una prueba rápida donde un anticuerpo o antígeno se une a una enzima como medio para detectar una compatibilidad entre el anticuerpo y el antígeno.
Esta prueba versátil se utiliza ampliamente en los laboratorios clínicos y le permite al médico:
Analizar la sangre del paciente con un antígeno (ej., virus o bacterias) para ver si su sistema inmunológico lo reconoce como algo que ha visto antes
Analizar la sangre del paciente para ver si una sustancia particular como una hormona (un antígeno) está presente en su organismo.
MATERIAL ADICIONAL NECESARIO
Lector ELISA
Estufa de 37º C
Estufa de 37º C con agitador
Reloj
Vortex
Cámara húmeda.
Pipeta automática graduable de 0,5 a 10 ul.
Pipeta automática graduable de 150 a 1000 ul.
Pipeta automática de 10 ul.
Pipeta automática de 20 ul.
Pipeta automática de 50 ul.
Pipeta automática de 100 ul.
Pipeta automática de 1000 ul.
Gradillas para tubos de vidrio.
Tubos de 13 x 100 mm.
Tubos Ependorf de 2 ml.
Punteras descartables
Macro centrífuga de tubos
CHAGAS ELISA
LINEA: WIENER
1.- Muestra.-
Suero.
2.- Contenido del kit.-
Solución de lavado concentrado 25x. Solución de dilución del suero.
Control positivo Bajo. Control positivo Alto.
Control Negativo. Conjugado Anti Ig G
Sustrato A y B
3.- Procedimiento.-
· Dispense 200 ul de la solución de dilución del suero en cada uno de los pocillos a utilizar.
· Dispense 10 ul de controles y sueros en el pocillo correspondiente. Incluya un control positivo alto, dos controles positivos bajos y dos controles negativos.
· Selle la placa con el papel autoadhesivo provisto, para impedir la evaporación de los reactivos.
· Incube por 30 minutos a 37º C en cámara húmeda.
· Lave la placa con solución de lavado diluida aproximadamente 350 ul. Elimine la solución después de cada lavado. 5 veces si se hace en forma manual.
· Después del último lavado ponga la placa invertida y golpéela suavemente sobre el papel absorbente. No permita que la placa se seque.
· Dispense 1 gota de conjugado a todos los pocillos.
· Selle la placa e incube por 30 minutos a 37º C en cámara húmeda.
· Lave la placa con solución de lavado 5 veces.
· Dispense 1 gota de substrato A y 1 gota de substrato B a cada pocillo.
· Incube la placa en oscuridad absoluta durante 30 minutos y a Tº ambiente.
· Detener la reacción agregando 1 gota de solución stop a cada pocillo. Los pocillos positivos inicialmente de color azul intenso, se tornan amarillos. Los pocillos negativos incoloros o levemente azulados, permanecen incoloros o presentan una leve coloración amarilla.
· Efectúe la lectura con un lector ELISA, usando filtro de 450 y 630 n m.
4.-Cálculos.-
Valor de Corte: Factor (0.200) + x CN
5.- Interpretación de los Resultados.-
POSITIVO = cuando su absorbancia sea mayor que el valor Cut Off.
NEGATIVO = cuando su absorbancia sea menor que el valor del Cut Off.
LABORATORIO “Dr. ZUNA”
SECCION
INMUNOLOGIA
SOLICITUD DE ANALISIS
La solicitud de ANALISIS, será siempre emitida por el médico responsable del tratamiento o en su defecto por orden verbal del paciente.
La solicitud debe ser por escrito, en forma clara y debe contener por norma los siguientes datos:
· Fecha de la solicitud.
· Nombre (s) y Apellidos del Paciente.
· Edad del paciente.
· Clínica en la que se encuentra internado el paciente si corresponde.
· Datos de transfusiones anteriores.
· Sello con Matrícula Profesional del Médico solicitante.
TIPO DE MUESTRAS
El área de inmunologìa, recepcionara muestras de sangre sin anticoagulante y
En casos especiales muestras anticoaguladas (tacrolimus).
Otros líquidos biológicos a expresa solicitud del medico del paciente.
REGISTRO INTERNO DEL PACIENTE
Las muestras que ingresan al área, generalmente deben tener un registro de ingreso por secretaria, donde se le asigna un número personal y un código de barra, único en todo el laboratorio.
El área de inmunología, revisa el código del paciente y las pruebas solicitadas, mediante el sistema informático en red, guiándose por el número personal asignado y/o el nombre del paciente.
Se precederá a realizar un registro interno del paciente donde se le asigna un número de ingreso. El cual se convertirá en el número diario de trabajo y de depósito para su búsqueda posterior, se hace notar que este es un registro numérico exclusivamente de uso en el área y no del laboratorio.
REGISTRO DE LAS PRUEBAS
El área de inmunología maneja un cuaderno de registro de pruebas donde se registra el nombre del paciente, registro del laboratorio y numero interno del área, del cual se realiza el copiado de los resultados obtenidos.
LABORATORIO INMUNOSEROLOGIA
ELISA
Es una prueba rápida donde un anticuerpo o antígeno se une a una enzima como medio para detectar una compatibilidad entre el anticuerpo y el antígeno.
Esta prueba versátil se utiliza ampliamente en los laboratorios clínicos y le permite al médico:
Analizar la sangre del paciente con un antígeno (ej., virus o bacterias) para ver si su sistema inmunológico lo reconoce como algo que ha visto antes
Analizar la sangre del paciente para ver si una sustancia particular como una hormona (un antígeno) está presente en su organismo.
MATERIAL ADICIONAL NECESARIO
Lector ELISA
Estufa de 37º C
Estufa de 37º C con agitador
Reloj
Vortex
Cámara húmeda.
Pipeta automática graduable de 0,5 a 10 ul.
Pipeta automática graduable de 150 a 1000 ul.
Pipeta automática de 10 ul.
Pipeta automática de 20 ul.
Pipeta automática de 50 ul.
Pipeta automática de 100 ul.
Pipeta automática de 1000 ul.
Gradillas para tubos de vidrio.
Tubos de 13 x 100 mm.
Tubos Ependorf de 2 ml.
Punteras descartables
Macro centrífuga de tubos
CHAGAS ELISA
LINEA: WIENER
1.- Muestra.-
Suero.
2.- Contenido del kit.-
Solución de lavado concentrado 25x. Solución de dilución del suero.
Control positivo Bajo. Control positivo Alto.
Control Negativo. Conjugado Anti Ig G
Sustrato A y B
3.- Procedimiento.-
· Dispense 200 ul de la solución de dilución del suero en cada uno de los pocillos a utilizar.
· Dispense 10 ul de controles y sueros en el pocillo correspondiente. Incluya un control positivo alto, dos controles positivos bajos y dos controles negativos.
· Selle la placa con el papel autoadhesivo provisto, para impedir la evaporación de los reactivos.
· Incube por 30 minutos a 37º C en cámara húmeda.
· Lave la placa con solución de lavado diluida aproximadamente 350 ul. Elimine la solución después de cada lavado. 5 veces si se hace en forma manual.
· Después del último lavado ponga la placa invertida y golpéela suavemente sobre el papel absorbente. No permita que la placa se seque.
· Dispense 1 gota de conjugado a todos los pocillos.
· Selle la placa e incube por 30 minutos a 37º C en cámara húmeda.
· Lave la placa con solución de lavado 5 veces.
· Dispense 1 gota de substrato A y 1 gota de substrato B a cada pocillo.
· Incube la placa en oscuridad absoluta durante 30 minutos y a Tº ambiente.
· Detener la reacción agregando 1 gota de solución stop a cada pocillo. Los pocillos positivos inicialmente de color azul intenso, se tornan amarillos. Los pocillos negativos incoloros o levemente azulados, permanecen incoloros o presentan una leve coloración amarilla.
· Efectúe la lectura con un lector ELISA, usando filtro de 450 y 630 n m.
4.-Cálculos.-
Valor de Corte: Factor (0.200) + x CN
5.- Interpretación de los Resultados.-
POSITIVO = cuando su absorbancia sea mayor que el valor Cut Off.
NEGATIVO = cuando su absorbancia sea menor que el valor del Cut Off.
CHAGAS y TOXO HAI
LINEA: POLYCHACO
1.- Muestra.-
Suero limpio y libre de hemólisis.
2.- Contenido del Kit.-
Diluyente de muestra
Solución proteica
Antígeno (glóbulos rojos de carnero sensibilizados.
Solución de glóbulos rojos control.
Controles positivo y negativo.
Policubetas con fondo en U.
3.- Procedimiento previo.-
· Preparación de la solución diluyente: 0,95 Solución diluyente y 50 ul de solución proteica.
· Cubrir toda la poli cubeta con cinta diurex, para evitar el depósito en ella de partículas de polvo.
· Homogenizar bien todos los reactivos, controles y antígenos.
· Elaborar el protocolo de trabajo de la siguiente manera: Control Positivo, Control Negativo, control de calidad biológico y Muestras.
4.-Método
· Al pocillo A dispensar 45 ul del diluyente preparado, a los posteriores solo25ul.
· Dispensar 5 ul de los controles y las muestras respectivamente. Dilución 1:1
· Realizar diluciones continuas pasando 25ul del pocillo A al B, mezclando y asi sucesivamente hasta llegar al pocillo H, del cual se debe descartar 25 ul. La diluciones serán en : A 1/10, B 1/20, C1/40, D1/80, E 1/160, F1/320, G 1.640 y H1/1280.
· Dispensar a todos los pocillos 25ul de antígenos (Eritrocitos de carnero sensibilizados) que el kit trae preparado.
· Llevar al agitador de Chagas o bien manualmente durante 3 minutos.
· Sellar con la cinta diurex e incubar durante 1 a 2 horas en lugar sin movimiento.
· Efectuar la lectura por formación de manto y botón.
8.- Interpretación de los resultados.-
POSITIVO = Presencia de manto grande o mayor a 50% en el fondo de pocillo
NEGATIVO = Presencia de botón en el fondo del pocillo.
LINEA: POLYCHACO
1.- Muestra.-
Suero limpio y libre de hemólisis.
2.- Contenido del Kit.-
Diluyente de muestra
Solución proteica
Antígeno (glóbulos rojos de carnero sensibilizados.
Solución de glóbulos rojos control.
Controles positivo y negativo.
Policubetas con fondo en U.
3.- Procedimiento previo.-
· Preparación de la solución diluyente: 0,95 Solución diluyente y 50 ul de solución proteica.
· Cubrir toda la poli cubeta con cinta diurex, para evitar el depósito en ella de partículas de polvo.
· Homogenizar bien todos los reactivos, controles y antígenos.
· Elaborar el protocolo de trabajo de la siguiente manera: Control Positivo, Control Negativo, control de calidad biológico y Muestras.
4.-Método
· Al pocillo A dispensar 45 ul del diluyente preparado, a los posteriores solo25ul.
· Dispensar 5 ul de los controles y las muestras respectivamente. Dilución 1:1
· Realizar diluciones continuas pasando 25ul del pocillo A al B, mezclando y asi sucesivamente hasta llegar al pocillo H, del cual se debe descartar 25 ul. La diluciones serán en : A 1/10, B 1/20, C1/40, D1/80, E 1/160, F1/320, G 1.640 y H1/1280.
· Dispensar a todos los pocillos 25ul de antígenos (Eritrocitos de carnero sensibilizados) que el kit trae preparado.
· Llevar al agitador de Chagas o bien manualmente durante 3 minutos.
· Sellar con la cinta diurex e incubar durante 1 a 2 horas en lugar sin movimiento.
· Efectuar la lectura por formación de manto y botón.
8.- Interpretación de los resultados.-
POSITIVO = Presencia de manto grande o mayor a 50% en el fondo de pocillo
NEGATIVO = Presencia de botón en el fondo del pocillo.
CISTICERCOSIS IgG ELISA,
LINEA: Ridascreen
1.-Muestra.-
Suero y LCR
2.- Leer el prospecto
3.- Procedimiento.-
· Atemperar los reactivos 30 minutos antes de iniciar la prueba.
· Preparar los protocolos de trabajo en el siguiente orden:
· Control Negativo, Control positivo,
· Diluir las muestras 490ml e diluyente con 10ul de suero..
· Dispensar en los pocillos previamente marcados 100 ul .
· Dispensar los controles después de la muestra para evitar posibles contaminaciones.
· Agitar suavemente durante 15 segundos, cubrir e incubar la tira en cámara húmeda para evitar desecación a T A durante 15 min.
· Lavar 5 veces con sol. de lavado 1:20 (19 agua destilada desionozada y 1 ml de buffer)secando en papel filtro absorbente.
· Los pocillos no deben contener restos de buffer para evitar contaminación.
· Dispensar 2 gotas de conjugado preparado.
· Agitar suavemente durante 15 segundos, cubrir e incubar la tira en cámara húmeda para evitar desecación a T A durante 15 min.
· Lavar 5 veces.
· Dispensar 1 gota de TMB y 1 gota de sustrato
· Incubar la tiras 15min en cámara oscura.
· Parar la reacción añadiendo 1 gota de ácido sulfúrico
· Proceder a la lectura en un lector de ELISA.
7.- Cálculos.-
Consultar con sistema de registro
COMBO HBS
METODO: ICT
1.- Muestra.-
Suero.
2.- Procedimiento.-
· Atemperar el sachet 15 minutos antes.
· Abrir el sachet y proceder a identificarlo con el número del paciente.
· Depositar la muestra en el pocillo.
· Depositar 2 gotas para cada uno de los pocillos. dejar 15 minutos en reposo.
3.- Resultado.-
HBs ag, HBs AB, HBe ag
NEGATIVO: Una sola marca coloreada en zona C y no así en zona T.
I
C T
POSITIVO: Una Marca coloreada en Zona C y Una Marca Coloreada en zona T
I
I
C T
INVALIDO: Si no aparecen las Marcas Coloreadas.
C T
HBe AB y HBc
NEGATIVO: Una sola marca coloreada en zona C y no así en zona T.
I
I
C T
POSITIVO: Una Marca coloreada en Zona C y Una Marca Coloreada en zona T
I
C T
INVALIDO: Si no aparecen las Marcas Coloreadas.
CONTROL DE CALIDAD
CONTROL DE CALIDAD INTERNO EN SEROLOGIA
El control de calidad interno preparado a partir de pool de muestras de sueros que dieron resultados reactivos, constituyendo este un panel, cuyos valores de absorbancia son conocidos y registrados.
Estos sueros son alícuotas en cantidades adecuadas para cada fin, almacenados a –20º C.
El procesamiento de este control de calidad interno se efectuará en la rutina diaria de las muestras a procesar.
Se utilizara una muestra del panel de sueros existentes en el Laboratorio y provenientes de otros centros de referencia.
Los sueros se guardan por 2 años a -20º de temperatura, con la finalidad de tener un respaldo ante cualquier reclamo posterior de una prueba realizada.
CONTROL DE LOS EQUIPOS
La temperatura a cada uno de los equipos en forma diaria y registrada en planillas.
El control de velocidad de la centrifuga de tubos se hará periódicamente con el tacómetro incluido en el mismo aparato.
BIOSEGURIDAD
El no infectarse de una enfermedad viral en campo laboral, se logrará adoptando normas y precauciones universales de bioseguridad, que aplicadas en forma correcta contribuyen a reducir la incidencia de accidentes de trabajo e infecciones de agentes patógenos.
NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD
Barreras Aisladoras
1. Guantes de látex. El personal deberá lavarse las manos o cambiar los guantes entre un paciente y otro, teniendo en cuenta que el mismo se debe usar donde se entre en contacto con cualquier fluido corporal.
2. Mandil manga larga, usado encima de la vestimenta normal, dentro del área de laboratorio, el que debe dejarse en el área clínica ante la necesidad de salir del centro, (no usar mas de tres días)
3. Barbijo, que proteja la cavidad bucal y fosas nasales.
Pautas de Bioseguridad
1. Lavarse las manos al ingresar y salir de las áreas de toma de muestras, laboratorio y producción de hemoderivados.
2. Realizar la limpieza del mesón de trabajo con una solución hipoclorito de Sodio al 5%, previo a comenzar la rutina de trabajo.
3. No ingresar al área de refrigerio con mandil de trabajo y guantes.
4. No ingerir alimentos en las áreas de trabajo ni fumar.
5. Tener recipientes adecuados para el descarte de especimenes contaminantes antes de proceder a quemar.
6. Usar soluciones antisépticas concentradas. (hipoclorito de Sodio al 5%).
7. El lavado de material se debe realizar con igual cuidado que una muestra recién extraída.
Bioseguridad Industrial
1. Revisar a diario la toma de corriente de los equipos eléctricos.
2. Informar al servicio técnico sobre cualquier desperfecto.
3. Revisar los cables de tierra.
4. Procurar buena iluminación en todos los ambientes de trabajo.
5. Cerrar apropiadamente los equipos de computación.
Soluciones de Trabajo
Llamamos soluciones de trabajo, a aquellas que se necesitan preparar en la rutina de trabajo y deben ser preparadas según cita la presente.
Solución Nº 1
Hipoclorito de Sodio 5%
Para 1 litro:
1.- Preparar 950 de agua potable en un recipiente de boca ancha.
2.- Adicionar 50 ml de hipoclorito de sodio concentrado (lavandina concentrada)
3.- Agitar y usar de inmediato.
Uso.- Limpieza de mesones.
LINEA: Ridascreen
1.-Muestra.-
Suero y LCR
2.- Leer el prospecto
3.- Procedimiento.-
· Atemperar los reactivos 30 minutos antes de iniciar la prueba.
· Preparar los protocolos de trabajo en el siguiente orden:
· Control Negativo, Control positivo,
· Diluir las muestras 490ml e diluyente con 10ul de suero..
· Dispensar en los pocillos previamente marcados 100 ul .
· Dispensar los controles después de la muestra para evitar posibles contaminaciones.
· Agitar suavemente durante 15 segundos, cubrir e incubar la tira en cámara húmeda para evitar desecación a T A durante 15 min.
· Lavar 5 veces con sol. de lavado 1:20 (19 agua destilada desionozada y 1 ml de buffer)secando en papel filtro absorbente.
· Los pocillos no deben contener restos de buffer para evitar contaminación.
· Dispensar 2 gotas de conjugado preparado.
· Agitar suavemente durante 15 segundos, cubrir e incubar la tira en cámara húmeda para evitar desecación a T A durante 15 min.
· Lavar 5 veces.
· Dispensar 1 gota de TMB y 1 gota de sustrato
· Incubar la tiras 15min en cámara oscura.
· Parar la reacción añadiendo 1 gota de ácido sulfúrico
· Proceder a la lectura en un lector de ELISA.
7.- Cálculos.-
Consultar con sistema de registro
COMBO HBS
METODO: ICT
1.- Muestra.-
Suero.
2.- Procedimiento.-
· Atemperar el sachet 15 minutos antes.
· Abrir el sachet y proceder a identificarlo con el número del paciente.
· Depositar la muestra en el pocillo.
· Depositar 2 gotas para cada uno de los pocillos. dejar 15 minutos en reposo.
3.- Resultado.-
HBs ag, HBs AB, HBe ag
NEGATIVO: Una sola marca coloreada en zona C y no así en zona T.
I
C T
POSITIVO: Una Marca coloreada en Zona C y Una Marca Coloreada en zona T
I
I
C T
INVALIDO: Si no aparecen las Marcas Coloreadas.
C T
HBe AB y HBc
NEGATIVO: Una sola marca coloreada en zona C y no así en zona T.
I
I
C T
POSITIVO: Una Marca coloreada en Zona C y Una Marca Coloreada en zona T
I
C T
INVALIDO: Si no aparecen las Marcas Coloreadas.
CONTROL DE CALIDAD
CONTROL DE CALIDAD INTERNO EN SEROLOGIA
El control de calidad interno preparado a partir de pool de muestras de sueros que dieron resultados reactivos, constituyendo este un panel, cuyos valores de absorbancia son conocidos y registrados.
Estos sueros son alícuotas en cantidades adecuadas para cada fin, almacenados a –20º C.
El procesamiento de este control de calidad interno se efectuará en la rutina diaria de las muestras a procesar.
Se utilizara una muestra del panel de sueros existentes en el Laboratorio y provenientes de otros centros de referencia.
Los sueros se guardan por 2 años a -20º de temperatura, con la finalidad de tener un respaldo ante cualquier reclamo posterior de una prueba realizada.
CONTROL DE LOS EQUIPOS
La temperatura a cada uno de los equipos en forma diaria y registrada en planillas.
El control de velocidad de la centrifuga de tubos se hará periódicamente con el tacómetro incluido en el mismo aparato.
BIOSEGURIDAD
El no infectarse de una enfermedad viral en campo laboral, se logrará adoptando normas y precauciones universales de bioseguridad, que aplicadas en forma correcta contribuyen a reducir la incidencia de accidentes de trabajo e infecciones de agentes patógenos.
NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD
Barreras Aisladoras
1. Guantes de látex. El personal deberá lavarse las manos o cambiar los guantes entre un paciente y otro, teniendo en cuenta que el mismo se debe usar donde se entre en contacto con cualquier fluido corporal.
2. Mandil manga larga, usado encima de la vestimenta normal, dentro del área de laboratorio, el que debe dejarse en el área clínica ante la necesidad de salir del centro, (no usar mas de tres días)
3. Barbijo, que proteja la cavidad bucal y fosas nasales.
Pautas de Bioseguridad
1. Lavarse las manos al ingresar y salir de las áreas de toma de muestras, laboratorio y producción de hemoderivados.
2. Realizar la limpieza del mesón de trabajo con una solución hipoclorito de Sodio al 5%, previo a comenzar la rutina de trabajo.
3. No ingresar al área de refrigerio con mandil de trabajo y guantes.
4. No ingerir alimentos en las áreas de trabajo ni fumar.
5. Tener recipientes adecuados para el descarte de especimenes contaminantes antes de proceder a quemar.
6. Usar soluciones antisépticas concentradas. (hipoclorito de Sodio al 5%).
7. El lavado de material se debe realizar con igual cuidado que una muestra recién extraída.
Bioseguridad Industrial
1. Revisar a diario la toma de corriente de los equipos eléctricos.
2. Informar al servicio técnico sobre cualquier desperfecto.
3. Revisar los cables de tierra.
4. Procurar buena iluminación en todos los ambientes de trabajo.
5. Cerrar apropiadamente los equipos de computación.
Soluciones de Trabajo
Llamamos soluciones de trabajo, a aquellas que se necesitan preparar en la rutina de trabajo y deben ser preparadas según cita la presente.
Solución Nº 1
Hipoclorito de Sodio 5%
Para 1 litro:
1.- Preparar 950 de agua potable en un recipiente de boca ancha.
2.- Adicionar 50 ml de hipoclorito de sodio concentrado (lavandina concentrada)
3.- Agitar y usar de inmediato.
Uso.- Limpieza de mesones.
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